تصفح
دخول
تسجيل
نسيتها؟

real time PCR


real time PCR

المعلومة

ما هو ال REAL TIME PCR ؟

نقاش مفتوح

المرجع

molecular biology

by


From Wikipedia, the free encyclopedia

Quote:

In molecular biology, real-time polymerase chain reaction, also called quantitative real time polymerase chain reaction (qPCR) or kinetic polymerase chain reaction, is a laboratory technique based on the polymerase chain reaction, which is used to amplify and simultaneously quantify a targeted DNA molecule. It enables both detection and quantification (as absolute number of copies or relative amount when normalized to DNA input or additional normalizing genes) of a specific sequence in a DNA sample.[/quote

Quote:
The procedure follows the general principle of polymerase chain reaction; its key feature is that the amplified DNA is quantified as it accumulates in the reaction in real time after each amplification cycle

. ]
يعني باختصار هيي عملية هدفها زيادة كمية الدنا بالمخبر بتفاعل تسلسلي بيسكح بالحصول علةى ملايين النسخ من سلسلة DNAبفترة وجيزة عن طريق تقليد العملة الحيوية اللي بيصير فيها تناسخ الDNA بالجسم بوساطة انزيم البوليميراز
.

butterfly86's picture
butterfly86
بعد التخرج


شو الفرق بين ال real time pcr و classical pcr

عملية التضخيم هي للجين المطلوب بالكامل

مثلا في حال x frqgile syndrome

من الناحية الطبية ما هي اهمية real time PCR

khalaf77


pcr الكلاسيكي بشكل عام كيفي اي لا يمكن اجراء قياس كمي لعدد النسخ المضخمة على عكس pcr الحقيقي

الوقت المستهلك لاجراء ال pcr بالزمن الحقيقي اقصر من الكلاسيكي

في نهاية التفاعل تظهر النتيجة في pcr بالزمن الحقيقي على شكل قيمة رقمية تسمى ct و لكن النتيجة في الكلاسيكي تحتاج الى اجراء رحلان كهربائي لمنتجات التفاعل على الاغاروز لمعرفة النتيجة

عند الانسان تضخيم الجين كاملا ممكن و لو انه صعب بسبب كبر الجينات البشرية و احتوائها على الانترونات

لذلك يمكن تضخيم مناطق معينة من الجين وهنا تبرز خبرة المخبري في اختيار المنطقة المرادة و اختيار ما يسمى primer من اجل اجراء التفاعل

في حال متلازمة x fragile نفوم بتضخيم المنطقة التي تحوي CGG REPEATS و ذلك للتشخيص عددها

ال PCR بالزمن الحقيقي يفيد بشكل اساسي في الحالات التى نحتاج لمعرفة الفرق في عدد انسخ الاولي من DNA كما الحال في الامراض الفيروسية ما يسمى الحمل الفيروسي مثلا

khalaf77


شكراً دكتور.

DAM's picture
DAM


الموضوع يحتاج مني بحث اكتر حتى افهم الفرق بينهماEye-wink
ولكن مشكور جدا دكتور خلف فعلا موضوع يستحق البحث

butterfly86's picture
butterfly86
بعد التخرج

Quote:
الموضوع يحتاج مني بحث اكتر حتى افهم الفرق بينهما

اذا كان لديك اسئلة قد استطيع مساعدتك

khalaf77


عادة منتجات ال PCR لا تتجاوز ال 1000 اساس PAIR BASE لذلك

من الناحية النظرية مبدا التفاعل هونفسة

ولكن بعض النقلط الاساسية
1-دائما يتم العمل اما على GENOMIC DNA OR cDNA والفرق بينهما هو ان cDNA هو ناتج عن RNA المستنسخ اي هو تفاعل RETROTRANSCRIPTION اي لايحوي على الانترونات و لا يمثل سوى الاكسونات

في GENOMIC DNA يوجد الاكسونات و الانترونات

لذلك عندما نريد اجراء اي تفاعل PCR يجب ان نعرف ما هو الجزء من الجينوم المراد تضخيمه

على سبيل المثال اذا كنا مهتمين بالبحث MICRODELETION في الصبغي Y ,لتكن مثلا المنطقة ADFb والتي تغيب في بعض حالات العقم الذكري

يمكن ان نقوم باجراء تفاعل PCR على مجموعة من الجينات الموجودة في هذه المنطقة
لذلك نحدد اولا ما هي الجينات المطلوب البحث عنها وهذا حاليا معروف بسبب ان الخريطة المورثية للانسان اصبحت معروفة

و بعد ذلك نجري التفاعل على اجزاء من هذه الجينات و الشرط الاساسي هنا ان لايوجد CROSSMATCHING مع هذه القطع و مع قطع مشابهة في جينات اخرى فنجري ما يسمى ALIGNEMENT لهذه القطع مع غيرها

و عند الانتهاء من هذه المرحلة يجب ايجاد ما يسمى ب PRIMER وهي قطهة متسلسلة من ال DNA لا تتجاوز ال 21 اساس مهمتها بدء التفاعل و يتم اختيارها عن طريق برامج متعددة حسب الشروط المطلوبة من درجة الحرارة TM وغير ذلك و من ثم يجرى التفاعل المراد

بعد الانتهاء من التفاعل توخذ منتجات التفاعل و يجرى لها رحلان كهربائي ELECRTOPHORESIS على جيل و نحن نعرف مسبقا ما هو حجم قطعة ال DNA المطلوبة فاذا وجدت فهذا يعني ان هذه المورثة موجودة في هذا الموضع واذا لم توجد فهذا يدل على غيلب المورثة في هذا الموضع و يالتالي قد يدل على وجود حذف في الصبغي

khalaf77


thanx Razz

qusei
ابق على تواصل مع حكيم!
Google+